應(yīng)用簡(jiǎn)介

本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取結(jié)合高效液相色譜的方法，建立了辣椒油中羅丹明B的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)20%丙酮的正己烷溶液（V/V）提取，Cleanert Alumina-N固相萃取柱凈化，Venusil MP C18色譜柱（4.6 × 150 mm，5 µm，100 Å）分離，水和甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，外標(biāo)法進(jìn)行定量。結(jié)果表明，羅丹明B添加量為0.05 mg/kg時(shí)，回收率在90% ~ 100%之間，能夠滿足檢測(cè)要求。

羅丹明B(Rhodamine B)又稱玫瑰紅B,或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料。經(jīng)老鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，羅丹明B會(huì)引致皮下組織生肉瘤，被懷疑是致癌物質(zhì)。羅丹明B在溶液中有強(qiáng)烈的熒光，用作實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞熒光染色劑、有色玻璃、特色*和爆竹等行業(yè)。曾經(jīng)用作食品添加劑，但后來(lái)實(shí)驗(yàn)證明羅丹明B會(huì)致癌，現(xiàn)在已不允許用作食品染色。

因此通過(guò)有效的實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，對(duì)辣椒油中的有關(guān)羅丹明B殘留進(jìn)行監(jiān)控，以確保消費(fèi)者對(duì)辣椒油消費(fèi)的安全具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化前處理方法建立了羅丹明B在辣椒油中的高效液相色譜的檢測(cè)方法。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）；

博納艾杰爾12位負(fù)壓SPE裝置。

試劑材料

丙酮、甲醇、正己烷為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）；

一次性無(wú)菌注射器；Nylon針式過(guò)濾器(0.45 µm，直徑13 mm)；

Cleanert Alumina-N固相萃取柱：2000 mg/6 mL

樣品制備

樣品提取

稱取1 g辣椒油于40 mL玻璃瓶中，加入10 mL 20%丙酮的正己烷溶液（V/V），振蕩搖勻后待凈化。

樣品凈化

先將小柱用6 mL正己烷活化平衡，然后將待凈化液過(guò)柱，棄去全部流出液，然后用10 mL 20%丙酮的正己烷溶液（V/V）進(jìn)行淋洗，最后用10 mL 2%氨化甲醇（V/V）洗脫。收集洗脫液于40℃氮?dú)獯蹈?，? mL甲醇溶解殘留物，過(guò)0.45 µm Nylon針式過(guò)濾器后待測(cè)。

以上凈化步驟可用卓睿全自動(dòng)固相萃取儀完成。

實(shí)驗(yàn)條件

液相條件

色譜柱：Venusil MP C18，5 µm，100 Å，4.6 × 150 mm

流動(dòng)相：甲醇︰水=75︰25（V/V）

柱  溫：30℃

進(jìn)樣量：20 µL

檢測(cè)波長(zhǎng)：550 nm

結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，采用固相萃取結(jié)合液相色譜法檢測(cè)羅丹明B，辣椒油基質(zhì)加標(biāo)回收率在90%以上，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。

表1.辣椒油中羅丹明B加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1. 0.05 µg/mL羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖

圖2. 辣椒油基質(zhì)空白液相色譜圖

圖3. 0.05 mg/kg辣椒油基質(zhì)加標(biāo)液相色譜圖

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了辣椒油中羅丹明B殘留量的檢測(cè)方法，并結(jié)合高效液相色譜對(duì)辣椒油中羅丹明B的含量進(jìn)行了測(cè)定。對(duì)于加標(biāo)量為0.05 mg/kg的辣椒油樣品，回收率在90% ~ 100%之間，符合實(shí)驗(yàn)要求。

附：相關(guān)產(chǎn)品